Nissan 2.2 di ошибка p1251
Автореферат диссертации по теме «Межклеточная коммуникация в популяциях Pectobacterium atrosepticum SCRI1043 при взаимодействии с растением-хозяином и в условиях голодания»
На правах рукописи
□03408 128
03.00.12,- физиология и биохимия растении 03.00.07.- микробиология
1 о ДЕК 2009
003488128
Научный руководитель: кандидат биологических наук,
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор,
доктор биологических наук, Минибаева Фарида Вилевна
им. Ульянова-Ленина
С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Казанского научного центра РАН.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук А.Б. Иванова
Постановка проблемы и ее актуальность. Формирование растительно-микробных сообществ в естественных экосистемах является сложным и динамичным процессом, в результате которого возникают различные типы взаимоотношений между макро- и микроорганизмами. Важную роль при развитии инфекционных заболеваний растений, установлении симбиотических и ассоциативных взаимоотношений играют процессы передачи информационных сигналов, обеспечивающие формирование адекватного физиологического ответа партнеров друг на друга и на условия окружающей среды. Описанию сигнальных систем бактерий и растений посвящено достаточно много теоретических и экспериментальных работ (Whitehead et al., 2001; Тарчевский, 2002). Однако лишь в последние годы появились предпосылки для изучения способов и механизмов вмешательства растений и бактерий в функционирование сигнальных систем друг друга (Mathesius et al., 2003; Boyer, Wisnievvski-Dye, 2009).
В изучении взаимодействия сигнальных систем макро- и микроорганизмов сделаны лишь первые шаги. Однако становится очевидным, что функциональные перестройки этих систем в различных условиях существенным образом отражаются на процессах передачи сигнала, что в значительной степени определяет «поведение» партнеров при взаимодействии. Межклеточная коммуникация необходима также для успешного переживания фитопатогенными бактериями условий невегетационного периода, что обеспечивает сохранение микроорганизмов и начало нового жизненного цикла, сопряженного с формированием взаимоотношений с растением-хозяином. В связи с этим, исследование способов вмешательства растений в бактериальный
Цель и задачи исследования. Выяснение влияния метаболитов растений на систему межклеточной коммуникации P. atrosepticum SCRI1043 (Ра), а также роли этой системы в распознавании растения-хозяина и адаптации к стрессовым условиям нсвегетационного периода составило цель данного исследования. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
2. Выяснить участие системы межклеточной коммуникации Ра в распознавании растения в качестве организма-хозяина.
4. Выяснить влияние неблагоприятных для роста условий (ограничение субстрата, длительная инкубация без смены среды культивирования) на жизнеспособность, ультраструкгурные и молекулярно-генетическис особенности клеток Ра.
6. Выяснить особенности функционирования системы межклеточной коммуникации Ра при неблагоприятных для роста условиях, имитирующих невегетационный период.
происходит при участии водорастворимых термостабильных метаболитов растения с молекулярной массой менее 5 кДа.
Впервые показан спонтанный или индуцируемый аутоиндукторами анабиоза (С|2-алкилок»сибензолом) переход клеток Ра в покоящееся состояние, сопряженное с полной потерей колониеобразующей способности и вирулентности. Установлено, что покоящиеся клетки Ра восстанавливают пролиферативную активность и фитопатогенность после смены среды инкубирования. Показано, что переход клеток в покоящееся состояние сопряжен с изменением матричных свойств надмолекулярных комплексов ДНК (НК ДНК).
Научно-практическая значимость. Полученные данные вносят существенный вклад в понимание процессов взаимодействия растений-хозяев и фитопатогенных бактерий, а также адаптации микроорганизмов к условиям невегетационного периода. Результаты работы могут служить основой для создания новых способов контроля растительных бактериозов.
Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследования. Исследования проводились в соответствии с планами НИР КИББ КазНЦ РАН (номер госрегистрации 01.2.007 03823); поддержаны грантом РФФИ № 08-04-01518-а, а также грантом ведущей научной школы академика И.А. Тарчевского.
Положения, выносимые на защиту. ]. Метаболиты специфичного и неспецифичного растения-хозяина (картофель и табак, соответственно) индуцируют экспрессию гена АГЛ-синтазы и синтез АГЛ у Ра, что свидетельствует об участии растения-хозяина в активации системы межклеточной коммуникации (кворум-сенсинг). Индуцирующий эффект при этом оказывают водорастворимые термостабильные метаболиты растений, имеющие молекулярную массу менее 5 кДа.
3. В условиях голодания клетки Ра способны к обратимому переходу в покоящееся состояние, сопряженное с потерей способности к образованию колоний и фитопатогенности, с изменением ультраструктуры клеток, а также матричных свойств надмолекулярных комплексов ДНК.
Апробация работы. Результаты работы доложены на 12-ой международной Путинской школе-конференции «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2008); международной школе-конференции «Генетика микроорганизмов и биотехнология», (Москва — Пущино, 2008); 4-ом съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. (Новосибирск, 2008); международной конференции «Генетика и биотехнология XXI века. Фундаментальные и прикладные аспекты» (Минск, 2008); 13-ом симпозиуме студентов и аспирантов «SymBioSE 2009, Biology: Expansion of Borders» (Казань, 2009); Всероссийской научной конференции «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах», посвященной памяти М.В. Гусева (Москва, 2009); 34-ом международном конгрессе FEBS «Life’s Molecular Interactions» (Прага, 2009); 1-ом Европейском конгрессе по бактериальным биопленкам «Eurobiofilms 2009» (Рим, 2009); Всероссийской конференции «Устойчивость организмов к неблагоприятным факторам внешней среды» (Иркутск, 2009); итоговых конференциях Казанского института биохимии и биофизики КазНЦ РАН (2007,2008).
Струюура н объем диссертации. Диссертация изложена на 187 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, изложения и обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы. В работе представлено 2 таблицы и 25 рисунков. Список литературы включает 294 источника; из них 261 иностранных.
В работе был использован штамм Pectobacteríum atrosepíicum SCRI1043 (Pa) (Envinia carotovora subsp. atroseptica SCRI1043) из коллекции микроорганизмов Белорусского гос. университета (г. Минск), любезно предоставленный доц. Е.А. Николайчиком. Штамм Escherichia coli JLD271, а также рекомбинантные плазмиды рАЫОЗ и pAL104 любезно предоставлены проф. И.А. Хмель (Amber, Ahmer, 2005).
В экспериментах по влиянию метаболитов растений на систему кворума и продукцию факторов вирулентности Ра использовали измельченные (2-3 мм) побеги стерильных растений, а также их водорастворимые экстракты. Бактериальные клетки инкубировали (плотность инокуляции (2-5) х 107) в модифицированной среде D5 (Kado, Heskett, 1970) или в среде IM (Wei et ai, 1992), в том числе в присутствии измельченных тканей растений табака или картофеля (1 г / 20 мл) или их экстрактов, а также с добавлением среды LB (1/10). Культуры инкубировали при 25 °С без перемешивания. Процедура приготовления экстрактов основывалась на протоколе, описанном ранее (Mo et al., 1995). Измельченную растительную массу заливали деионизированной водой (1/2,5, вес/объем) и экстрагировали при 4 °С в течение 2 ч. Экстракт центрифугировали (24000 g), фильтровали через нитроиеллюлозный фильтр (0,45 мкм), подвергали ультрафильтрации через мембранный фильтр Vivaspin 20 (5000 MWCO, Millipore), лиофилизировали и растворяли в денонизованной воде.
Для амплификации участков ДНК Ра конструировали праймеры, комплементарные фрагментам генов expl, rsmB, rpoD, hrpA, hrpL, dspE и области межгенного спейсера 16S-23S рРНК на основе последовательности генома Ра (NC_004547). Праймеры и флуоресцентные зонды синтезировали в НПО «Сшггол» (Москва). Накопление ПЦР продуктов оценивали по эмиссии зонда TaqMan с помощью амплификатора с оптическим модулем ICycler IQ-4 (Bio-Rad).
Дня определения уровня экспрессии генов expl, rsmB, hrpA, hrpL, dspE использовали сравнительный метод (Pfaffi, 2001). Каждый образец анализировали в двух повторностях ПЦР; отсутствие значимых количеств геномной ДНК подтверждали, проводя ПЦР с образцами, приготовленными без этапа обратной траскрипции. Представленные данные рассчитаны по результатам четырех независимых экспериментов с повторяющимися закономерностями. На диаграммах представлены средние значения и стандартные ошибки среднего. Относительный уровень экспрессии expl в голодающих культурах определяли по соотношению количества копий кДНК, соответствующих транскриптам expl и rpoD (стабильно экспрессирующийся ген «домашнего хозяйства» (Sreedharan et al., 2006)).
Пекгатлиазную активность определяли по описанной методике (Shevchik et al., 1997). Удельную пекгатлиазную активность выражали в мкмоль ненасыщенного продукта / мин / мг сухого веса клеток Ра.
Для определения интакгности мембран клеток Ра клеточные суспензии окрашивали красителями из набора BacLight Live/Dead (Mol. Probes, США). Препараты просматривали в конфокальном лазерном сканирующем микроскопе LSM 510 Meta (Carl Zeiss, Германия). Проводили дифференцированный учет клеток с красной (543 нм) и зеленой (488 нм) флуоресценцией.
Статистический анализ данных проводили с применением стандартных математических методов (расчет среднеквадратичного отклонения, сравнение средних по критерию Стьюдента). Критерий вероятности /»<0,05 принимали достаточным для достоверной разницы опытной и контрольной 1рупп данных. Сравнение нескольких выборок, полученных в экспериментах, анализировали с помощью метода дисперсионного анализа (АМОУА).
В случае справедливости данной гипотезы, в присутствии факторов растительного происхождения должно происходить увеличение уровня экспрессии бактериальных генов гхтВ и ехр1. Действительно, в проведенных нами экспериментах добавление тканей как специфичного (картофель), так и неспецифичного (табак) растения-хозяина в культуры Ра приводило к индукции экспрессии этих генов (рис. 1). Вероятной причиной этого могло послужить появление дополнительного питательного субстрата (компоненты растительных тканей), что, в свою очередь, могло отразиться на численности клеток, участвующих в «кворуме». Однако при добавлении среды ЬВ или использовании среды В5 уровень экспрессии птВ и ехр1 был значительно ниже, чем в присутствии растительных тканей. Кроме того, значения КОЕ/мл, определенные нами для всех вариантов опыта, существенно не
картофеля (2) и табака (3), а также при культивировании бактерий на среде 1М, обогащенной ЪВ-бульоном (4), и синтетической среде Б5 (5), Уровень экспрессии представлен в относительных единицах.
о о.
2 3 4 5 6ч
По нашему мнению, особого внимания заслуживают данные, указывающие на то, что факторы специфичного хозяина оказывали больший индуцирующий эффект на экспрессию гена АГЛ-синтазы по сравнению с факторами неспецифичного хозяина (рис. 1). Это свидетельствует о том, что роль бактериальной системы межклеточной коммуникации в растительно-микробном сигналинге более значима, чем мы предполагали в начале исследования. По всей вероятности, кроме того, что система кворума Ра активируется неспецифичными метаболитами растения, она также интегрирована в другие сигнальные системы, сопряженные с видовым распознаванием растения в качестве организма-хозяина и выбором стратегии, соответствующей характеру взаимодействия.
Рис. 2. Биотесг на присутствие АГЛ в супернатантах культур Ра. Определение относительного содержания АГЛ проводили на основе анализа эмиссии флуоресценции у штамма £. coli JLD271, несущего репортерную плазмиду рАЫОЗ. Планшет А: лунки содержали 180 мкл культуры Е. coli JLD271 + pAL103; в лунки в рядах а, б, в добавлена серия разведений JV-(3-оксогексаноил)-Ь-гомосерин лактона; в лунки рядов б ив были также добавлены экстракты тканей картофеля и табака, соответственно; в лунки рядов г, д, е, ж добавлено 20 мкл экстрактов супернатантов культур Ра, инкубируемых в LB-бульоне (г); в среде IM (с)); в среде IM в присутствии тканей растений картофеля (е) и табака (ж). Планшет Б: 180 мкл культуры Е. coli JLD271 + pAL103; ряд а — серия разведений А-(3-оксогексаноил)-Ь-гомосерин лактона (0, 1, 2, 5, 10 мкмоль, соответственно). Ряд б 20 мкл экстрактов супернатантов культур Ра, инкубируемых 24 часа в среде IM (3, б); в среде IM в присутствии низкомолекулярной водорастворимой фракции тканей растений табака (4, б) и картофеля (5, б).
А 0 1 2 5 10 — —
б ■ —Щ ш щ о S
г
е г т r я ■J
Б 1 2 3 4 5
я KJ б
Наблюдаемые эффекты не являются следствием описанной ранее АГЛ-мимикрии (Teplitski et а!., 2000; Degrassi et al., 2007), поскольку экстракты растений табака и картофеля не индуцировали флюоресценцию Е. coli JLD27I + pAL103, а также не влияли на световую продукцию биосенсоров при экзогенном внесении jV-(3-оксогексаноил)-£-гомосерин лактона (рис. 2 б, в). Следовательно, побеги табака и картофеля не содержат функциональных аналогов АГЛ, выступающих в качестве аутоиндукторов системы кворума у Ра. Это позволяет считать, что механизм активации системы кворума Ра за счет метаболитов растения-хозяина определяется не АГЛ-мимикрирующими соединениями, а другими, ранее не описанными, факторами. Таким образом, индукция системы межклеточной коммуникации происходит в результате усиления синтеза бактериального аутоиндуктора (но не его функциональной аналогии) факторами растительного происхождения.
степени активации бактериальной системы кворума при различных по характеру взаимодействиях в системе патоген/растение-хозяин. По всей вероятности, активное вмешательство растительного организма в передачу сигнала у фитоассоциированных бактерий во многом обеспечивает пластичность и разнообразие процессов становления растительно-микробных ассоциаций.
23. Влияние метаболитов растений на экспрессию генов системы секреции третьего типа Ра. На ранних этапах взаимодействия с растением-хозяином у многих фитопатогенных бактерий происходит активация системы секреции третьего типа (ССТТ). Этот фактор вирулентности необходим для транспортировки бактериальных эффекторных белков в клетку растения. Функционирование ССТТ оказывает влияние на сигнальные системы растений, а ее активация зависит от сигнальных систем бактерий, что является наглядным примером интерференции сигнальных систем макро- и микроорганизма.
Таким образом, нами продемонстрировано, что экспрессия кворум-зависимых генов системы секреции третьего типа может регулироваться дифференцированно при наличии факторов специфичного растения-хозяина.
Г
I
1 2 3 4 5
Рис. 3. Экспрессия генов ИгрА (А) и еЬрЕ (Б) Ра при культивировании клеток на индукционной среде 1М (1), на среде 1М в присутствии тканей картофеля (2) и табака (3), а также при культивировании бактерий на среде 1М, обогащенной ЬВ-бульоном (4), и синтетической среде 05 (5), Уровень экспрессии представлен в относительных единицах.
2.4. Адаптивные реакции Ра в условиях, имитирующих невегетационный период. Одним из ключевых этапов растительно-микробных взаимодействий является подготовка макро- и микроорганизма к условиям невегетационного периода. Успешная реализация стратегии переживания стрессовых условий фитоассоциированными бактериями благоприятствует сохранению резерва их популяций, а также способствует сохранению устойчивых растительно-микробных ассоциаций в естественных экосистемах. В связи с этим, выяснение способов и механизмов переживания неблагоприятных условий неспорообразующими бактериями необходимо для понимания механизмов формирования растительно-микробных сообществ.
2
ш О
Рис. 4. Динамика численности КОЕ/мл в культурах Ра, инкубированных в минеральной безуглеродной среде АВ при различной плотности инокуляции: 5х108 (♦). 4х 107 (•), 5х106 (.), 5*105 (о), 6×10″ (А), 6×103 (Д) КОЕ/мл.
Наблюдаемые процессы корректировки численности популяции Ра в условиях голодания предполагают возможность плотностно-зависимой регуляции. Мы предположили, что увеличение численности клеток при отсутствии субстрата и низкой исходной численности связано с необходимостью запуска системы межклеточной коммуникации, во многом определяющей способность к адаптации у бактерий. В связи с этим, мы оценили динамику экспрессии гена АГЛ-синтазы в
2
ш О
О 6
Экстракты супернатантов культур Ра, инкубируемых на безуглеродной среде при низкой исходной плотности популяции (8,5×102 КОЕ/мл), после увеличения численности клеток и достижения плотности популяции 106 КОЕ/мл индуцировали биолюминесценцию АГЛ-сенсорного штамма (рис. 6). Вероятно, накопление АГЛ может служить сигналом для прекращения процессов клеточного деления и переходу в состояние покоя. Достижение максимального значения титра КОЕ совпадало по времени с накоплением АГЛ в супернатантах таких культур. При этом концентрация АГЛ была достаточна лишь для слабой индукции флуоресценции у Е.соИ ЛЛ3271 + рАЫОЗ (рис. 6). Однако эта концентрация аутоиндуктора воспринималась голодающими клетками Ра, о чем свидетельствует индукция экспрессии гена АГЛ-синтазы (рис. 5).
свидетельствует о наличии дополнительных, помимо АГЛ, факторов позволяющих бактериям оценивать численность своей популяции.
z
с; 2
1.00Е+07 -|
1.00Е+05
1,00Е+03
Рис. 7. Динамика численности КОЕ/мл в культурах Ра, инкубированных в минеральной безуглеродной среде АВ (♦), среде АВ с добавлением 50 мкМ
1
Для вьшвления предполагаемых факторов межклеточной коммуникации культуральные жидкости опытных культур были протестированы на присутствие в них компонентов, ингибирующих увеличение численности популяции бактерий на безуглеродной среде. Для этого клетки тестируемых культур были удалены фильтрованием через шпроцеллюлозные фильтры (с£=0,2 мкм). После инокуляции кондиционированных сред, полученных от культур низкой исходной плотности клеток (104 КОЕ/мл) после трех суток инкубирования, увеличения численности клеток не происходило (рис. 7). Напротив, супернатанты голодающих культур с титром инокуляции 108 КОЕ/мл не влияли на пролиферацию бактерий в условиях дефицита субстрата (рис. 7). Таким образом, голодание клеток Ра при различной плотности популяции предусматривает различные стратегии их поведения и опосредовано не одинаковым фоном сигнальных экстраклеточных метаболитов. Сигналы, продуцируемые культурами с высокой плотностью популяции, не могут компенсировать действие факторов, останавливающих процесс увеличения численности популяции на безуглеродной среде в культурах с исходно низкой плотностью бактериальных клеток.
Z
С*
ш
1.00Е+10 1.00Е+08 1,00Е+06 1.00Е+04 1.00Е+02 Т.00Е+00
Рис. 8. Динамика численности колониеобразую-щих клеток (титра КОЕ/мл) в культурах Ра, длительно инкубированных в
та
S2
cf |
§
‘1234 jl234^ 1234 1
Рис. 9. Динамика
Невыявляемостъ клеток Ра при помощи микробиологических высевов может свидетельствовать либо об их гибели, либо о переходе в покоящееся состояние. Важным аргументом в пользу жизнеспособности клеток является сохранение ими интактности мембран, что было подтверждено при помощи витального окрашивания клеток Ра красителями BacLightTM Bacterial Viability (Invitrogen).
Рис. 10. Микрографии срезов клеток Ра: А -вегетативные клетки; Б, В -клетки, инкубированные на безуглеродной среде А В в течение 150 суток; НМ -наружная мембрана; ГШ -периплазматическое пространство; ЦПМ — цито-плазматическая мембрана; Ц — цитоплазма; Н -нуклеоид. Масштабная метка — 200 нм.
Переход клеток Ра в некультивируемое состояние обратим. Воспроизводимый эффект на восстановление колониеобразующей способности (от 0,5% до 10% от исходного титра КОЕ) оказывала отмывка клеток в свежей минеральной среде АВ (рис. 8, 9). При этом увеличение титра КОЕ происходило за счет восстановления способности некультивируемых форм к образованию колоний, а не размножения некой части клеток, поскольку: 1) использовали суспензии с нулевым титром КОЕ, не содержащие культивируемых клеток; 2) процедура «оживления» краткосрочна (30 мин.); 3) для отмывки клеток использовали безуглеродную среду. Следует отметить, что подобранные нами условия, способствующие обратимому переходу Ра в некультивируемое состояние, имитируют возможные ситуации в естественных условиях обитания этих фитопатогенных бактерий.
титра выявляемых геномных копий (ГК) (рис. 9). После 7 суток инкубирования в лизатах таких клеток нам не удавалось выявить целевую ДНК при помощи ПЦР, хотя сам по себе С/2-АОБ не влиял на эффективность реакции.
2.6. Фитопатогенность клеток Ра, находящихся в различных физиологических состояниях. Вопрос о вирулентности покоящихся форм микроорганизмов остается открытым. Микроорганизмы могут сохранять вирулентность в покоящемся состоянии (Ballone et al., 2006), полностью терять вирулентность (Maalej et al., 2004), сохранять способность к реверсии в вегетативные формы в организме хозяина, не вызывая симптомов заболевания (Du et al., 2007b), либо требовать факторов растения-хозяина для возобновления пролиферативной активности и проявления вирулентности (Grey, Steck, 2001). Вегетативные клетки Ра проявляли вирулентность в отношении растения-хозяина (табак) и приводили к его гибели в течение 2-7 дней в зависимости от инфекционной нагрузки (более 1,7×104 клеток). Покоящиеся формы Ра были авирулентны в отношении табака. Микробиологические высевы из растений, инфицированных покоящимися формами, не выявляли бактериальных колоний, что свидетельствовало об отсутствии реверсии покоящихся форм в вегетативные клетки in planta. Отсутствие симптомов заболевания не было связано со сниженной инфекционной нагрузкой: обнаруживаемая численность клеток при их «оживлению) превышала достаточную для развития инфекции в случае вегетативных клеток. «Оживленные» клетки вызывали симптомы заболевания у 10% инфицированных растений. При этом зона некроза была ограничена. Вирулентность «оживленных» клеток полностью восстанавливалась после их пассирования на полноценной питательной среде. Таким образом, обратимый переход в состояние покоя, связанный с изменением ультраструкгурных и молекулярно-гснетических особенностей клеток Ра, сопряжен с
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Полученные нами результаты расширяют представление о способах переживания невегетационного периода фитоассоциированными бактериями, что обеспечивает сохранение устойчивых растительно-микробных сообществ. Важным этапом при этом является оптимизация плотности популяции клеток при участии системы межклеточной коммуникации.
На ранних стадиях взаимодействия с растением-хозяином за счет факторов макроорганизма может происходить частичная индукция бактериальной системы кворума (1), которая способствует запуску микробной системы секреции третьего типа (2), репрессирующей защитные реакции растения-хозяина (3), и обеспечивает умеренную продукцию экзоферментов (2*) для получения бактериями ростового субстрата (3*). При достижении высокой плотности популяции (4) наступает острая стадия инфекции, при которой дополнительно активируется система кворума по классическому механизму за счет выработки АГЛ возрастающим количеством клеток (5); происходит «выключение» аппарата секреции третьего типа (6), утратившего эффективность к этому времени, и осуществляется полноценная продукция экзоферментов (7), приводящая к гибели растения.
Рис. 11. Гипотетическая схема активации системы кворума в зависимости от условий обитания’ .микроорганизмов. Пояснения к рисунку даны в тексте. Щ. — активация системы кворума
запуске, существуют иные факторы регуляции системы межклеточной коммуникации. Эти факторы могут обладать аддитивным эффектом и/или определять восприимчивость клеток к различным концентрациям АГЛ.
ВЫВОДЫ:
2. Впервые показано, что система кворума Р. atrosepticum SCRI1043 является частью сигнальной сети, отвечающей за распознавание растения в качестве организма-хозяина. Водорастворимые термостабильные низкомолекулярные (менее 5 кДа) метаболиты специфичного растения-хозяина (S. tuberosum) приводят к большей индукции синтеза АГЛ и пекгатлиазной активности, чем неспецифичного (N. tabacum).
4. Впервые показан спонтанный или индуцируемый аутоиндуктором анабиоза С12-алкилоксибензолом переход клеток Р. atrosepticum SCRI1043 в покоящееся состояние, сопряженное с потерей колониеобразующей способности и изменением ультраструктуры. Покоящиеся клетки Р. atrosepticum SCRI1043 восстанавливают пролиферативную активность после смены среды инкубирования.
ДНК, что приводит к затруднению ее детекции при помощи ПЦР. Восстановление способности ДНК к амплификации в ходе ПЦР происходит при реверсии клеток в вегетативные формы, а также достигается путем очистки ДНК покоящихся клеток.
7. Впервые показано, что при неблагоприятных для роста условиях, имитирующих невегетационный период, в популяциях P. atrosepticum SCRI1043 происходит регуляция концентрации клеток, обладающих пролиферативной активностью. При этом оптимизация плотности популяции осуществляется при участии межклеточной коммуникации.
1. Регуляция экспрессии генов межклеточной коммуникации бактерий метаболитами растений / В.Ю. Горшков, О.Е. Петрова, Н.Е. Мухаметшина, Ю.В. Гоголев // Материалы конференции / Пущинского НЦ РАН. — Москва-Пущино, 2008. — С. 131-132.
3. Ультраструктура некультивируемых клеток Erwinia carotovora и их вирулентность / А.Г. Даминова, В.Ю. Горшков, О.Е. Петрова, Н.Е. и др. // Сб. тезисов / Пущинского НЦ РАН — Пущино, 2008. — С. 262.
5. Ультраструктурные и молекулярно-генетические изменения в клетках Erwinia catotovora при переходе в «некультивируемое» состояние / Ю.В. Гоголев, В.Ю. Горшков, О.Е. Петрова, и др. // Материалы конференции / Издательский центр БГУ. — Минск, 2008. — С. 11-13.
7. Cross cell density-dependent communication during the initial stages of response to stress in Erwinia carotovora / V.Y. Gorshkov, O.E. Petrova, A.G. Daminova, I.Sh. Khusainov, Y.V. Gogolev // Abstracts / Rome, 2009. — P.48.
9. Образование покоящихся форм Erwinia carotovora / Ю.В. Гоголев, В,Ю. Горшков, О.Е.Петрова, Н.Е. Мухаметшина, А.Г. Даминова, М.В. Агеева // Бюллетень Московского общества испытателей природы. / МАКС Пресс. -Москва, 2009.-Т. 114, №2, приложение 1. — С.164—166.
11. Диагностика различных физиологических форм Erwinia carotovora / А.Г. Даминова, В.Ю. Горшков, O.E. Петрова, М.В. Агеева, Н.Е. Мухаметшина, Ю.В. Гоголев // Сб. тезисов / Путинского НЦ РАН. -Пущино, 2009. — С. 198.
13. Образование «некультивируемых» покоящихся форм фитопатогенной энтеробактерии Erwinia carotovora / В.Ю Горшков, O.E. Петрова, Н.Е. Мухаметшина, М.В. Агеева, А.Л. Мулюкин, Ю.В. Гоголев // МАИК, Микробиология. — 2009. — Т. 78, №5. — С. 647-655.
Подписано в печать 19.11.09г. Форм. бум. 60×80 1/16. Печ. л. 1,75.